熟妇女人妻丰满少妇中文字幕,四川少妇BBW搡BBBB槡BBBB,老妇高潮潮喷到猛进猛出,艳妇乳肉豪妇荡乳AV无码福利,亚洲AV成人片色在线观看高潮,高清伦理影院,无码永久免费av网站,棉花糖视频在线观看国产一区/国产超碰人人模人人爽人人添/久久精品www人人爽人人 ,丰满人妻一区二区三区视频53_久久久97人妻无码精品蜜桃_精品人妻无码专区在中文字幕_蜜臀久久99精品久久久久久小说 ,成 人 A V免费视频在线观看_美女视频黄的全免费视频网站_亚洲字幕成人中文在线电影网_少妇厨房愉情理9仑片视频下载

新聞詳情
所在位置: 首頁> 公司新聞> 新聞中心>

蛋白純化常見問題(二)

日期:2025-07-09 10:17
瀏覽次數(shù):1895
摘要:蛋白純化常見問題(二)
那么下面上海嘉鵬科技有限公司為大家簡單介紹一下蛋白純化常見問題(二)。
Q:Superdex 75( 球蛋白分離范圍 3 – 70 KDA), Superdex 200 (10 – 600 KDA) 和 Superose 6(5-5000 KDA),分離范圍有重疊,如何選擇?
A:一般使待分離樣品的分子量位于線性分離范圍中部。根據(jù)分子量 Marker 在三種柱子上的表現(xiàn),三者常規(guī)推薦 :蛋白分子量在 40 kDa 以下 (3 kDa 以上 ) 考慮使用 Superdex 75;40 – 400 kDa的樣品考慮使用 Superdex 200;分離 400 kDa 以上樣品時,建議選擇 Superose 6 Increase。

Q:脫鹽實驗中的緩沖液如何選擇?
A:如果我們用緩沖液 A 來平衡柱子,上樣后,走外水的樣品其實是跟著平衡時的緩沖液 A 出峰并溶解在其中的(而非*后趕樣品用的洗脫緩沖液)。因此,希望樣品溶解在緩沖液 A 中,就用緩沖液 A 來平衡柱子。緩沖液的選擇,依據(jù)實驗需求和填料本身耐受性,同時確保樣品在該緩沖液中穩(wěn)定存在。通常,使用 10-50 mM 磷酸鈉緩沖液,至少含有 25 mM NaCl 用于避免離子作用的非特異性吸附,中性 pH 7.0 ~ 7.4。或揮發(fā)性緩沖液如 100 mM 乙酸銨或碳酸氫銨。

Q:純化得到的組分中沒有或很少目的 His 標簽蛋白,怎么回事?
A:若目的 His 標簽蛋白正常表達(使用抗 His 標簽的抗體進行 WB 檢測)且充分釋放至上清中,確認蛋白是流穿還是未被洗脫:
若 His 標簽蛋白流穿 :
樣品或結合緩沖液的條件不合適,注意螯合劑或強還原劑以及咪唑的濃度。
His 標簽蛋白與填料的結合較弱:降低上樣流速或增加孵育時間 ;增加標簽 His 的數(shù)量(常用 6 – 10 個)。
His 標簽未充分暴露:在變性條件(4 – 8 M 尿素或 4 – 6 M 鹽酸胍) 下進行純化或測試;重新構建克隆,改變 His 標簽的位置。
嘗試其他的金屬離子:如 鋅離子,鈷離子等。
若 His 標簽蛋白未洗脫:
洗脫條件過于溫和:增加咪唑濃度或降低洗脫 pH(注意:pH降至 4.0 以下時 Ni2+ 會發(fā)生脫落)。
目的蛋白與填料發(fā)生非特異性疏水或其他相互作用:在洗脫緩沖液中加入非離子型去垢劑(如 2% Triton X-100)或提高 NaCl濃度。
目的蛋白在填料中發(fā)生了沉淀:減少上樣量;使用咪唑線性梯度而不是步級洗脫以降低洗脫得到的蛋白濃度;使用去垢劑或改變 NaCl 濃度;在變性條件 (4 – 8 M 尿素或 4 – 6 M 鹽酸胍 )下洗脫。


以上就是上海嘉鵬科技有限公司為大家整理總結關于蛋白純化常見問題(二)。
我們上海嘉鵬科技有限公司是專業(yè)生產超蛋白純化系統(tǒng)、超微量核酸蛋白測定儀、化學發(fā)光成像系統(tǒng)、凝膠成像分析系統(tǒng)、紫外分析儀、核酸蛋白檢測儀、紫外檢測儀、光化學反應儀、旋渦混合器、恒流泵、自動部分收集器等為核心的十幾個產品系列的廠家,歡迎大家前來訂購。
颍上县| 句容市| 洪湖市| 顺平县| 泰宁县| 清水河县| 邓州市| 伽师县| 灵台县| 郴州市| 会同县| 富顺县| 新郑市| 株洲市| 台北县| 余庆县| 信阳市| 七台河市| 张掖市| 土默特左旗| 中宁县| 那坡县| 平山县| 清苑县| 杭州市| 迁西县| 平山县| 碌曲县| 特克斯县| 响水县| 陆川县| 临西县| 米脂县| 甘肃省| 深水埗区| 绵阳市| 光泽县| 清河县| 黄大仙区| 盐池县| 辽宁省|